期刊简介
本刊1989年创刊，至今已17年。创刊以来，坚持明确的办刊宗旨，即传播医学信息，交流学术思想，探讨医学上的新理论、新方法、介绍防治工作中的经验，以临床普及为主，提高为辅，立足海南，面向全国，辐射海外，为发展我国医学事业，保护人民健康服务。
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- 杂志名称：海南医学杂志
- 主管单位：海南省卫生厅
- 主办单位：海南省医学会
- 国际刊号：1003-6350
- 国内刊号：46-1025/R
- 出版周期：半月刊
期刊荣誉：中国学术期刊(光盘版)全文收录期刊期刊收录：上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, CA 化学文摘(美), 知网收录(中), 万方收录(中)
利用慢病毒载体构建稳定干扰AMPKα1的HeLa细胞系
李树朋；陈浩；林晓莹；林广宏；赵斌；钟望涛；李文；冯杜
关键词：慢病毒载体, AMPKα1, RNA干扰, Hela细胞, metformin
摘要：目的 建立稳定干扰AMPKα1的HeLa细胞系.方法 利用AMPKα1慢病毒干扰质粒PLKO.1-puro-AMPKα1转染293T细胞制备重组慢病毒,然后用重组慢病毒感染HeLa细胞,荧光显微镜观察病毒感染效率,免疫印迹实验检测Sh-AMPKα1病毒感染组的AMPKα1表达.然后采用嘌呤霉素筛选出稳定干扰AMPKα1的HeLa细胞单克隆,免疫印迹实验和免疫荧光实验检测AMPKα1表达情况.后用AMPK激活剂Metformin实验验证AMPKα1稳定干扰的Hela细胞中AMPKα1蛋白的表达以及AMPKα1的生物功能.结果 荧光拍照结果显示慢病毒成功感染Hela细胞;免疫印迹实验显示特异性Sh-AMPKα1病毒感染组的AMPKα1表达[(0.58±0.02)DPI]比WT组[(1.00±0.00)DPI]低,免疫荧光实验结果也显示Sh-AMPKα1病毒感染组中AMPKα1的平均光密度[(0.09±0.01)IOD/area]比WT组[(1.00±0.00)IOD/area]要低,差异均具有显著统计学意义(P<0.01);经AMPK激活剂Metformin处理后,AMPKα1稳定干扰的Hela细胞中仍无AMPKα1蛋白表达,并且Sh-AMPKα1组中LC3-Ⅱ/Ⅰ/Actin[(1.00±0.00I)DPI]也显著低于HA-AMPKα1组[(1.62±0.02)DPI],表明病毒感染组细胞中AMPKα1不能发挥其生物功能,差异具有显著统计学意义(P<0.01).结论 利用ShRNA-AMPKα1慢病毒筛选出了高效干扰AMPKα1表达的HeLa细胞系,为后续深入研究AMPKα1的生物功能奠定了基础.
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