细胞质内高表达的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P21抑制人支气管上皮细胞凋亡

摘要：目的 研究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P21抑制人支气管上皮细胞凋亡的机制.方法 (1)表达细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P21的质粒PEGFP-N1-p21转染人支气管上皮细胞系16HBE,研究P21蛋白在细胞质、细胞核内的表达变化与质粒转染后细胞凋亡表现之间的相互关系.实验分组包括空白对照、空质粒及PEGFP-N1-p21质粒组,应用Westen-blot方法检测质粒转染24 h后P21蛋白在细胞质、细胞核内的表达变化相对值,流式细胞仪方法检测质粒转染24 h、48 h后的细胞凋亡率.(2)转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激人支气管上皮细胞系16HBE,研究TGF-β1刺激后P21蛋白在细胞质、细胞核内的表达变化与支气管上皮细胞凋亡之间的相互关系.实验分组包括TGF-β10 ng/mL、TGF-β13 ng/mL及TGF-β110 ng/mL组,应用Westen-blot方法检测TGF-β1刺激24 h后P21蛋白在细胞质、细胞核内的表达变化,流式细胞仪方法检测TGF-β1刺激12 h、24 h后的细胞凋亡率.结果 质粒PEGFP-N1-p21转染人支气管上皮细胞系16HBE 24 h后,PEGFP-N1-p21质粒组的P21蛋白在细胞质内表达水平高于空质粒组、空白对照组,并高于同组细胞核内,差异均有统计学意义(P<0.05);空质粒组、空白对照组的细胞质内P21蛋白表达水平低于细胞核内,差异均有统计学意义(P<0.05).PEGFP-N1-p21质粒转染24 h、48 h后,PEGFP-N1-p21质粒组凋亡率低于空质粒组及空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).PEGFP-N1-p21质粒转染24 h后的16HBE细胞凋亡率高于转染48 h后,而空质粒组和空白对照组表现相反结果.PEGFP-N1-p21质粒转染后,P21蛋白在细胞质内表达与转染后的细胞凋亡呈负相关.TGF-β1(0 ng/mL、3 ng/mL、10 ng/mL)作用于16HBE细胞24 h后,TGF-β13 ng/mL及10 ng/mL组的细胞核、细胞质内P21蛋白表达均高于TGF-β10 ng/mL组,差异均具有统计学意义(P<0.05),TGF-β13 ng/mL及10 ng/mL组的细胞质中P21蛋白表达均高于细胞核内P21蛋白(P均<0.05),10 ng/mL组胞质P21蛋白表达量低于3 ng/mL组(P<0.05).TGF-β1(0 ng/mL、3 ng/mL、10 ng/mL)作用于16HBE细胞12h、24 h后,同一作用时间下,随着TGF-β1刺激浓度增加,细胞凋亡率增加,TGF-β1(3 ng/mL、10 ng/mL)作用于16HBE细胞12 h、24 h后,同一作用浓度下,随着刺激时间延长,细胞凋亡率增加(P均<0.05).TGF-β1作用于人支气管上皮细胞系16HBE后,细胞质内P21蛋白增加与刺激后的细胞凋亡呈负相关.结论 PEGFP-N1-p21质粒转染人支气管上皮细胞后,P21蛋白表达于细胞质,抑制人支气管上皮细胞凋亡.TGF-β1作用于人支气管上皮细胞系16HBE后,刺激细胞质内P21蛋白表达增加,随着细胞质内P21蛋白表达下降,细胞凋亡增加.细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P21可通过在细胞质内高表达这一机制抑制人支气管上皮细胞凋亡.